Claire Redfield
Após conseguir escapar ilesa de Raccoon acompanhada de Leon e de Sherry, Claire começa uma investigação mais aprofundada sobre o paradeiro de seu irmão, Chris Redfield, que havia deixado Raccoon um mês depois do Incidente da Mansão, em Julho. Três meses depois de seu pesadelo em Raccoon, ela parte para a Europa e invade um laboratório da Umbrella, onde é descoberta e capturada. A jovem é levada como prisioneira para a Ilha Rockfort, pertencente à companhia. Pouco depois de sua chegada ao local, um misterioso ataque acontece, e o T-Virus que vinha sendo utilizado em experiências vaza por todo o complexo, transformando prisioneiros e guardas em mortos vivos, e libertando dezenas de horrendas armas biológicas que há muito vinham sendo mantidas nas instalações militares na ilha. Mais uma vez, ela terá que demonstrar sua determinação e força para fugir de um novo inferno.
Steve Burnside
Um jovem prisioneiro de apenas 17 anos de idade, Steve era filho de um ex-funcionário da Umbrella, que, por ganância, roubou informações da empresa para tentar vender para suas concorrentes, pelo melhor valor que lhe oferecessem. Ele é descoberto, os soldados particulares da Umbrella invadem sua casa e matam sua mãe. O destino de Steve e de seu pai, no entanto, é ainda mais cruel do que a morte, e eles são imediatamente levados como prisioneiros para a Ilha Rockfort. Seu pai havia traído não somente a confiança da Umbrella, mas também a sua, que passou a não confiar em mais ninguém. A sorte e a forma de pensar de Steve começam a mudar somente depois que ele conhece Claire e os dois precisam se unir, se quiserem deixar a Ilha Rockfort antes que acabem mortos como os demais prisioneiros e guardas do local.
Chris Redfield
Sobrevivente do Incidente da Mansão, em Julho de 1998, Chris decide investigar a Umbrella por conta própria depois que ele e seus companheiros dos S.T.A.R.S. são desacreditados pela população e pela polícia de Raccoon ao relatarem a descoberta das atividades ilegais da empresa farmacêutica na mansão. Após o fechamento do caso pelo corrupto chefe da polícia, o ex-S.T.A.R.S. deixa a cidade de Raccoon e parte para a Europa, onde descobre que há outro grande complexo da Umbrella. Chris acreditava que, partindo sem avisar sua irmã, ela estaria a salvo, mas nem imaginava que Claire seguiria para Raccoon em busca dele, e que recentemente havia se tornado uma prisioneira da Umbrella por seguir uma pista de seu paradeiro e invadir um complexo europeu da companhia. Ele é contatado por Leon, que recebe uma mensagem de Claire, da Ilha Rockfort, para que ela avise seu irmão de sua localização e de que está sendo monitorado pela corporação. Determinado a salvar sua irmã do perigo que ela agora enfrenta por sua causa, ele parte imediatamente para a Ilha Rockfort.
Albert Wesker
O ex-líder dos S.T.A.R.S. e informante da Umbrella tem sucesso em forjar a própria morte no Incidente da Mansão. Com isto, Wesker se vende para uma companhia rival da Umbrella, mas a destruição da arma biológica Tyrant T-102 coloca o seu valor à prova diante da nova empresa da qual agora fazia parte. Pesquisas o levam à descoberta a localização do poderoso vírus T-Veronica na Ilha Rockfort, pertencente à Umbrella e comandada pelos Ashford, uma antiga família aristocrata europeia. Com a obtenção de uma amostra do T-Veronica, Wesker espera não apenas provar o seu valor à sua nova companhia, mas também concluir seus planos obscuros. Ao lado de uma força paramilitar, ele ataca a ilha e causa o vazamento do T-Virus, mantido no laboratório das instalações militares, por todo o complexo. O vírus que ele usara na mansão não lhe deram apenas a sua liberdade da Umbrella, como também habilidades super-humanas, entre eles velocidade e reflexos incomuns, força e resistência acima dos padrões, e incrível capacidade de regeneração muscular.
Alfred Ashford
Comandante da Ilha Rockfort e neto de um dos fundadores da Umbrella, Alfred é membro da família Ashford, que um dia fora reconhecida como uma das mais importantes da aristocracia europeia. Após seu pai assumir a liderança da família e arruiná-la completamente, Alfred se dedica a servir à sua irmã gêmea, a brilhante Alexia, na esperança de que juntos eles restaurarão a glória perdida dos Ashford. O súbito ataque à Ilha Rockfort faz a insanidade de Alfred passar dos limites ao ver sua propriedade tomada por mortos vivos e armas biológicas. Ele acredita veementemente que Claire Redfield, recém-chegada à ilha como prisioneira, fora a responsável pelo ataque, sendo uma espiã que se deixara capturar propositalmente para depois passar suas coordenadas ao seu grupo. Tão cruel quanto paranóico, Alfred decide se divertir sadicamente, caçando Claire pela ilha.
Alexia Ashford
Considerada um prodígio desde criança, Alexia é considerada a esperança de restauração da glória dos Ashford, arruinada durante a geração de seu pai, Alexander. Sua inteligência fora dos padrões fez com que a garota se formasse em uma prestigiosa universidade com apenas 10 anos de idade, ganhando a posição de pesquisadora-chefe da Umbrella logo em seguida, onde iniciou as pesquisas de seu ambicioso projeto: a criação de um novo vírus, o T-Veronica. Ainda mais cruel e sádica do que Alfred, seu irmão gêmeo, Alexia acredita que todos existem para servi-la, e planeja transformar isto em realidade com o poder do T-Veronica. Para isto, ela toma a drástica atitude de ser a própria cobaia de seu grande experimento, permanecendo adormecida em um sono criogênico durante 15 anos.