Ark Thompson
Ark é um agente especial, que segue à Ilha Sheena a pedido de Leon S. Kennedy, seu amigo dos tempos da academia e recém-recrutado pelo serviço secreto dos Estados Unidos. A tarefa de Ark seria a de investigar as ações da Umbrella na ilha, uma cidade totalmente dominada pela poderosa companhia farmacêutica. Temendo que aquele local tivesse o mesmo destino de Raccoon, Leon solicita os serviços de seu amigo. No entanto, Ark sofre um acidente e acaba desmemoriado, em meio a um pesadelo cheio de armas biológicas, criado pelo comandante da ilha, o cruel Vincent Goldman.
Vincent Goldman
Comandante da Ilha Sheena e da Usina Tyrant instalada na cidade para a produção em massa de armas biológicas, Vincent é um homem de personalidade fria e perversa, que não hesita em matar até o seu melhor amigo para atingir os seus objetivos. Por conta de recentes acontecimentos, a população da ilha se volta contra ele e planeja denunciá-lo à Umbrella, o que desperta a ira de Vincent. Para se vingar, ele libera o T-Virus e o espalha pela Ilha Sheena, causando uma epidemia que mata todos os seus habitantes. O ato final de Goldman é se livrar do espião que se infiltrara na cidade, Ark Thompson.
Lott Klein
Filho de trabalhadores da fábrica da Umbrella na Ilha Sheena, Lott e sua irmã mais nova, Lily, acabam ficando sozinhos em meio à epidemia viral causada propositalmente pelo comandante Vincent Goldman na cidade. Seus pais se tornam vítimas do T-Virus e se transformam em zumbis e, com a morte deles, é Lott quem deve zelar pela segurança dele e de Lily. Incapaz de confiar novamente em alguém, após a tragédia que destruiu sua cidade e sua família, tudo o que ele quer agora é encontrar uma maneira de tirá-los da Ilha Sheena, antes que também se tornem mortos vivos.
Lily Klein
A pequena e inocente Lily perde seus pais quando a epidemia do T-Virus assola a Ilha Sheena, por obra de vingança do cruel comandante Vincent Goldman. Por ser muito pequena, ela apenas obedece as ordens de seu irmão mais velho, o adolescente Lott Klein, enquanto ele busca uma maneira de deixarem a cidade, antes que também acabem se tornando vítimas das horrendas criaturas que perambulam pelas ruas. Lily está muito assustada com o caos na ilha, e teme perder seu irmão, a única coisa que lhe restara no mundo.
Andy Holland
Um senhor extremamente reservado, Andy Holland é o zelador dos esgotos da Ilha Sheena e dificilmente sobe à superfície, o que, com o passar dos anos, o tornou uma pessoa cada vez mais reclusa e solitária. Ao chegar à cidade, Ark Thompson se aproveita do fato de Andy não conhecer o comandante da ilha e comete o erro de se identificar como Vincent Goldman para ele, para tentar extrair informações acerca das atividades da Umbrella na região. Após sofrer um acidente e perder a memória, Ark paga pelo seu erro, quando encontra Andy e ele o chama de Vincent, acusando-o pelo caos na ilha.